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人抗體ELISA試劑盒的原理及應(yīng)用介紹
更新時間：2023-11-09 點擊量：1677
人抗體ELISA試劑盒是一種常用的免疫學(xué)實驗方法，用于檢測體內(nèi)是否存在特定人類抗體的定量分析。其原理基于酶聯(lián)免疫吸附法，主要包括固相抗原涂布、樣品孵育、抗體結(jié)合和檢測信號等步驟。
人抗體ELISA試劑盒的基本原理如下：
首先，將待檢測抗原或抗體固定在微孔板上。這些固相抗原可以是純化的蛋白質(zhì)、多肽、糖類等，或者是細(xì)胞濾液、組織提取物等復(fù)雜混合物。通過固定，使抗原或抗體與微孔板表面非特異性地結(jié)合。
隨后，加入待測樣品到微孔中，并讓其充分接觸固相抗原，進(jìn)行孵育。如果樣品中存在與固相抗原或抗體特異性結(jié)合的抗體，它們將與固相抗原結(jié)合形成抗原-抗體復(fù)合物。
然后，洗滌孔內(nèi)未結(jié)合的物質(zhì)，以去除非特異性結(jié)合的成分。這個步驟能有效減少假陽性結(jié)果的產(chǎn)生，提高試劑盒的特異性。
接下來，加入與被檢測抗體特異性結(jié)合的檢測抗體，并使其與復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合。這樣，形成了夾心型結(jié)構(gòu)：固相抗原-待測抗體-檢測抗體。再次進(jìn)行洗滌，以去除未結(jié)合的檢測抗體。
最后，加入一種與檢測抗體結(jié)合產(chǎn)生顯色反應(yīng)的底物，一般是染色底物，常見的有TMB或ABTS。底物在酶的作用下發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，產(chǎn)生可測量的顏色。
通過測量反應(yīng)物顏色的強度，可以定量分析待測樣品中存在的特定人類抗體的濃度。通常使用光密度計或酶標(biāo)儀對反應(yīng)顏色進(jìn)行讀取，并將結(jié)果與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，計算出待測抗體的濃度。
人抗體ELISA試劑盒廣泛應(yīng)用于許多領(lǐng)域，包括臨床診斷、生物醫(yī)藥研究和生物工程等。具體應(yīng)用包括：
1、感染性疾病的診斷：ELISA可以檢測感染性疾病引起的抗體產(chǎn)生，用于早期感染篩查和疾病診斷。
2、自身免疫疾病的診斷：ELISA可檢測自身免疫疾病相關(guān)抗體的存在，幫助醫(yī)生進(jìn)行疾病診斷和監(jiān)測治療效果。
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